Publicado 22/12/2014

Método de alto rendimiento, basado en la técnica QuEChERS (de extracción rápida, fácil, económica, eficaz, sólida y segura), seguida de una cromatografía líquida con detector de múltiple longitud de onda, para la cuantificación de polifenoles multi-clase en vinos

Por: Ariel R. Fontana, Rubén Bottini. En: Journal of Chromatography A. Volume 1342, 16 May 2014, Pages 44-53.

En este trabajo, se propone un enfoque confiable, simple, rápido, económico y sólido para la preparación de muestras, para determinar polifenoles multiclase en muestras de vino. Los polifenoles seleccionados para este trabajo fueron ácido gálico, (+)- catequina, (+)- epicatequina, ácido caféico, ácido siríngico, ácido cumárico, ácido ferúlico, trans-resveratrol, quercetina y ácido cinámico. El método se basa en la técnica de extracción QuEChERS (método rápido, fácil, económico, eficaz, sólido y seguro – QuEChERS por sus siglas en inglés) seguido de una extracción en fase sólida por dispersión (d-SPE, por sus siglas en inglés). Los analitos se obtuvieron en condiciones optimizadas, a partir de muestras de vino de 5 ml (previamente acidificadas con 1% de ácido fórmico) utilizando 2,5 ml de acetonitrilo. Para la separación de fases, se agregó 1,5 g de NaCl y 4 g de MgSO4 anhidro. Luego se limpió una alícuota de 1ml del sobrenadante fraccionado utilizando una extracción en fase sólida por dispersión, con una combinación de 150 mg de CaCl2, 50mg de amina primaria y secundaria (PSA) y 50 mg de C18, utilizado como sorbente. Una alícuota de 250 L del extracto limpio obtenido fue concentrada a sequedad y obtenida con la fase móvil inicial, previo a la cromatografía líquida con detector de múltiple longitud de onda (LC-MWD). El método propuesto proporciona límites de detección que van desde 0,004 a 0,079 ?gmL (-1), y una variabilidad interdía con valores de desviación estándar relativa (RSD) por debajo del 12% para todos los analitos en muestras de vinos tintos y blancos. Considerando la calibración externa (vinos tintos) y la calibración emparejada por matriz (vinos blancos) como técnicas de cuantificación, la recuperación total (exactitud) del método osciló entre el 75,0 % y el 119,6 % para muestras de vino tinto y blanco, respectivamente. Se aplicó el método desarrollado para determinar polifenoles en 10 vinos producidos en Argentina. Se determinaron nueve compuestos fenólicos, con concentraciones superiores a los niveles detectables en el método. Las concentraciones máximas correspondieron a (-)-epicatequina en los vinos blancos, mientras que el ácido gálico y la (+)-catequina fueron los más abundantes en los tintos.

High-throughput method based on quick, easy, cheap, effective,rugged and safe followed by liquidchromatography-multi-wavelength detection for the quantification ofmulticlass polyphenols in wines

tIn this work, a reliable, simple, fast, inexpensive and robust sample preparation approach for the deter-mination of multiclass polyphenols in wine samples is proposed. The polyphenols selected for this workwere gallic acid, (+)-catechin, (-)-epicatechin, caffeic acid, syringic acid, coumaric acid, ferulic acid, trans-resveratrol, quercetin and cinnamic acid. The method is based on QuEChERS (quick, easy, cheap, effective,rugged and safe) extraction technique coupled with dispersive solid-phase extraction (d-SPE) clean-up.Under optimized conditions, the analytes were extracted from 5 mL wine samples (previously acidifiedwith 1% formic acid) using 2.5 mL acetonitrile. For phase separation, 1.5 g NaCl and 4 g anhydrous MgSO4were added. Then, a 1 mL aliquot of the partitioned supernatant was cleaned-up using d-SPE with a combi-nation of 150 mg CaCl2, 50 mg primary-secondary amine (PSA) and 50 mg C18as sorbents. A 250  _L aliquotof the obtained cleaned extract was concentrated to dryness and taken up with the initial mobile phaseprevious to liquid chromatography-multi-wavelength detection (LC-MWD). The proposed method pro-vided limits of detection (LODs) ranging from 0.004 to 0.079  _g mL-1and an inter-day variability below12% RSD for all analytes in red and white wine samples. Considering external calibration (red wines)and matrix-matched calibration (white wines) as quantification techniques, the overall recoveries (accu-racy) of the method ranged between 75.0% and 119.6% for red and white wine samples, respectively. Thedeveloped method was applied for the determination of polyphenols in 10 wines produced in Argentina.Nine phenolic compounds were determined, at concentrations above detectable levels in the method.The maximum concentrations corresponded to (-)-epicatechin in white wines, while gallic acid and(+)-catechin were the most abundant in red wines.

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